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酿酒酵母表达载体pGMAK质粒
一种表面展示淀粉酶的重组酿酒酵母及构建方法和应用。该重组酿酒酵母的构建方法为:将淀粉酶基因插入酿酒酵母表达载体pGMAK中GAL1启动子下游MFα1信号肽与酿酒酵母的细胞壁α凝集素基因之间,构建获得重组质粒;采用同源重组技术将酿酒酵母的GAL1基因替换为GAL4基因,将所述重组质粒转入该细胞,获得重组酿酒酵母。本发明通过同源重组技术获得了具有双重GAL4基因的重组酿酒酵母,可有效提高GAL1启动子表达效率;同时,细胞壁α凝集素能将淀粉酶高密度展示表达在酿酒酵母细胞壁外表面。利用该重组酿酒酵母表面展示淀粉酶,表达效率较高,表达量较大,能获得较高酶活的淀粉酶,且酵母发酵培养后可直接作为淀粉酶制剂使用。
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