黑曲霉基因敲除编辑质粒载体-BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

通过构建一种特殊的CRISPR/Cas9表达载体尝试在所有真菌中建立通用的CRISPR/Cas9体系。此载体包含复制起点、密码子优化的Cas9、tef1启动子、tef1终止子、SV40核定为信号、gpdA启动子、TrpC终止子、筛选标记(AFUM_pyr G、AN_arg B、bleR和hygR)、镶嵌在RNA聚合酶Ⅱ合成的较大转录物中间的gRNA等, 根据筛选标记的不同构建了四个不同的载体用于多种菌种。结果显示该体系成功的对构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的yA基因、棘孢曲霉的albA和pyrG基因进行了突变。此外, 还可以运用同一载体在5种不同的曲霉属菌种中引入albA同源物的特异性突变, 以促进在不同丝状真菌中引入常见突变。