各种表达系统质粒载体推荐-BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

各种表达系统质粒载体推荐

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一、大肠杆菌质粒：

1、大肠PCR模板克隆载体：pUC18，pUC19，pUC57，pACYC184等

2、大肠蛋白表达载体质粒

1>、pET-28a：T7启动，有6×His纯化标签

2>、pET-32a：T7启动，有6×His纯化标签和TrxA促溶标签

3>、pGEX4T-1：Tac启动，有GST纯化促溶标签

4>、pET28a-SUMO：T7启动，有6×His纯化标签和SUMO促溶标签

5>、pCold-SUMO：冷诱导，有6×His纯化标签和SUMO促溶标签

6>、pUC19-pJ23119-MCS：组成型表达

7>、pET28a-EGFP：表达质粒阳性对照。

大肠杆菌表达感受态推荐：

1、BL21(DE3)：常用于非毒性蛋白的高水平表达

2、BL21(DE3)pLysS：用于毒性蛋白的表达

3、BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL：用于富含AT或GC蛋白的表达

4、Rosetta(DE3)：补充大肠杆菌缺乏的稀有密码子

5、OrigamiB(DE3)：帮助含有二硫键的蛋白正确折叠

6、ArcticExpress(DE3)RP：可以表达适应低温的伴侣蛋白

7、Shuffle T7：帮助含二硫键的蛋白正确折叠

3、大肠Red基因敲除载体质粒

pKD46，氨苄抗性，阿拉伯糖诱导表达Red系统重组酶

pKD46-Tet，四环素抗性，阿拉伯糖诱导表达Red系统重组酶

pKD20，氨苄抗性，阿拉伯糖诱导表达Red系统重组酶

pREDKI，卡那抗性，I-SceI,阿拉伯糖诱导表达Red系统重组酶

pKDsgRNA-ack 阿拉伯糖诱导表达Red系统重组酶，四环素诱导转录sgRNA

pREDCas9：携带针对氨苄基因的gRNA

pKD13，提供卡那霉素抗性重组模板

pKD4，提供卡那霉素抗性重组模板

pKD3，提供氯霉素抗性重组模板

pCP20：FLP重组酶消除抗性

二、哺乳细胞质粒：

1、哺乳表达质粒：pECMV-MCS-3×FLAG  、 pCAG-MCS-3×FLAG、  pEF1-MCS-3×FLAG

2、哺乳荧光表达质粒：pEGFP-C1-2×Linker        

3、哺乳干扰质粒：pSilencer 2.1-U6-Neo

4、哺乳基因敲除质粒：pX459 V2.0

5、哺乳双荧光素酶系统质粒：

一、两种荧光素酶位于同一个载体上
哺乳细胞
pmirGLO（microRNA与mRNA，lncRNA靶向互作）
SV40启动子驱动hRluc的表达作为内参，PGK启动子驱动Luc作为报告基因，将待验证的元件克隆至Luc的3’端。
psiCHECK-2（microRNA与mRNA，lncRNA靶向互作）
HSVTK启动子驱动Luc作为内参，SV40启动子驱动hRluc作为报告基因，将待验证的元件克隆至hRluc的3’端。

植物
pGreen II-0800-Luc（启动子检测）
35S启动子驱动hRluc的表达作为内参，Luc作为报告基因，将待验证的启动子序列克隆至Luc的5’端，检测启动子的活性。
pGreenII-0800-miRNA（microRNA与mRNA，lncRNA靶向互作）
35S启动子驱动hRluc的表达作为内参，35S启动子驱动Luc作为报告基因，将待验证的元件克隆至Luc的3’端。
二、两种荧光素分别位于两个载体上：
内参载体pRL系列：可在哺乳细胞中组成型表达海洋腔肠荧光素酶Rluc，提供不同的启动子构型，可与萤火虫荧光素酶载体组合，作为报告基因的内参。在Rluc上游是一个T7启动子，可在体外合成Rluc的转录物。
pGL4.74
pRL-CMV
CMV启动子在多种细胞中可高强度、组成型地表达。
pRL-SV40
SV40启动子在多种细胞中可高强度、组成型地表达。
pRL-TK
HSV-TK启动子在胚胎和成熟的哺乳细胞中，可低水平、组成型地表达。
报告基因载体：将待验证的序列或元件插入到报告基因载体中，根据荧光素酶的活性反映检测的结果。
Luc2基因经过改造，去除大部分隐藏的转录因子结合位点，并通过编码优化提高了在哺乳细胞中的表达效率。Luc2P基因和Luc2CP基因在Luc基因的基础上增加了降解序列，可以调控Luc2基因在细胞中的半衰期，从而使基因对刺激的响应更快，但会影响其信号强度。Luc2基因半衰期为3小时，Luc2P基因半衰期为1小时，Luc2CP基因半衰期为0.4小时；其信号强度相反。
1、验证miRNA与靶基因3’UTR的结合：将靶基因3’UTR序列插入到荧光素酶的后面。
pMIR-Report Luciferase（CMV启动子）
pGL6-miR（PGK启动子）
2、验证miRNA同lncRNA靶向互作：将待测lncRNA序列插入到荧光素酶的前面。
pMIR-Report Luciferase（CMV启动子）
pGL6-miR（PGK启动子）
3、分析启动子/增强子：将启动子区域分段或突变，插入到荧光素酶前面。
pGL4.11[luc2P]
pGL4.14[luc2/Hygro]
pGL6
pGL3-Basic，不含启动子及增强子，将可能的启动子序列克隆到荧光素酶基因的上游，可测定其是否具有启动荧光素酶基因表达的活性。
pGL3-Promoter 含SV40的启动子可驱动荧光素酶基因表达。插入可能的增强子可增加荧光素酶基因的表达。
pGL3-Enhancer，在荧光素酶基因下游插入了SV40增强子，这可用于测定能增强荧光素酶基因表达的启动子。
pGL3-Control：含SV40的启动子及增强子，能产生高水平的荧光素酶基因表达。可作为检测转染频率的阳性对照。
4、验证转录因子同其调控序列：将调控序列（通常为启动子、增强子等调控元件）插入到荧光素酶前面，研究调控序列的基因转录调控活性。
pGL4.26[luc2-minP-Hygro]：
pGL4.27[luc2P minP Hygro]：
5、信号通路研究
Wnt信号通路
TopFlash：（Mini-TK promoter）
TopFlash用于检测Wnt信号通路中β-catenin介导的TCF/LEF转录活性水平，在荧光素上游有两组TCF/LEF结合位点序列，每组有三个重复序列，一组为正向序列，另一组是它的反向互补序列，可以高灵敏度地检测TCF/LEF的转录活性水平。TCF/LEF的转录活性水平与荧光素酶活性成正比，测定Wnt信号通路的激活水平。
FopFlash：（Mini-TK promoter）
FOPFlash质粒：在荧光素酶前面插入突变的TCF/LEF结合位点序列，是TOPFlash的阴性对照报告基因质粒。
pGL4.49[luc2P/TCF-LEF RE/Hygro]：
P53信号通路
pP53-TA-Luc：（TA promoter）
用于检测P53信号通路中P53转录活性水平，在荧光素上游插入P53结合位点序列。
JAK-STAT信号通路
pStat3-TA-Luc：TA promoter）
用于检测JAK-STAT信号通路中STAT3转录活性水平，在荧光素上游插入4个STAT3结合位点序列。
pGL4.52[Luc2P STAT5 RE Hygro]：
pGL4.47[luc2P SIE Hygro]：
SIE：sis-inducible element
pISRE-TA-luc：（TA promoter）
检测ISRE转录活性水平，在荧光素上游插入9个ISRE结合位点序列（GAAACT）。监测 Jak/STAT 介导的信号转导通路中STAT1和STAT2异二聚体的转录，STAT1和STAT2异二聚体与顺式作用的 ISRE 增强子元件结合后，转录被诱导，报告基因被激活。
TGF-β/BMP信号通路
pAP1-Luc：（TA promoter）
用于检测TGF-β信号通路中AP1转录活性水平，在荧光素上游插入6个AP1结合位点序列。
pGL4.48[luc2P SBE Hygro]
SBE：Samd-binding element
cAMP-PKA信号通路
pGL4.29-Luc2P-CRE-Hygro-CMV-EGFP
CRE：cyclic AMP response element，cAMP反应元件，参与多条信号通路；含有3个重复的CRE结合位点序列。
NFκB信号
pNFκB-TA-luc ：用于检测NFκB信号通路中NFκB转录活性水平，在荧光素上游插入2个NFκB结合位点序列(GGGAA TTTCCGGGAA TTTCC)。
其他转录因子
pNFAT-TA-Luc（TA promoter）
用于检测NFAT信号通路中NFAT转录活性水平，在荧光素上游插入NFAT结合位点序列。
pE2F-TA-Luc（TA promoter）
监测 E2F 介导的信号转导途径，E2F是成视网膜细胞瘤基因 (Rb) 的主要靶点，E2F蛋白与DP1蛋白形成异二聚体复合物 E2F/DP1，与顺式作用的 E2F 增强子元件结合后，转录被诱导，报告基因被激活。
pGRE-Luc（TA promoter）
检测GRE糖皮质激素介导的信号通路激活水平，在荧光素上游插入GRE结合位点序列。
pGL4.42[luc2P HRE Hygro]
HRE：hypoxia response element 低氧反应元件，调节相关基因的转录表达，使细胞避免或适应低氧状态；含有4个重复的HRE结合位点序列。
pARE-luc：检测ARE(antioxidant response element，抗氧化响应元件)的转录活性水平，在荧光素上游插入了2个ARE结合位点（ACTGAGGGT GACTCAGCAAAATC），可以用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态。

6、哺乳自噬质粒：pEGFP-LC3b（绿色）、pmCherry-LC3b（红色）、pmCherry-EGFP-LC3b（双荧光）、FUW mCherry-GFP-LC3（慢病毒双荧光）

7、哺乳四环素诱导表达质粒：pTRE3G-MCS-P2A-EGFP-3×FLAG-EF1a-Tetone-T2A-Puro（单质粒）、pTRE2pur + pTet-On-Advanced（双质粒）

三、慢病毒载体：

1、二代慢病毒质粒（ 质量比：pLVX：pSPAX2：pMD2.G=4:3:1）

     表达质粒：pLVX-Puro，pLVX-IRES-Puro

     干扰质粒：pLVshRNA-EGFP(2A)Puro

     干扰阴性对照质粒：pLVshRNA-U6-shRNA-Negative-Control-PGK-EGFP-E2A-Puro

     包装质粒：pSPAX2、pMD2.G  

2、三代慢病毒质粒（ 质量比：pCDH：pLP1：pLP2：pLP-VSVG=4:3:2:3）

     表达质粒：pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro、pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro

     干扰质粒：pCDH-U6-shRNA-EF1-Puro、pCDH-U6-shRNA-EF1a-CopGFP-T2A-Puro        

     包装质粒：pLP1、pLP2、pLP-VSVG    

3、慢病毒四环素诱导表达质粒：pLVX-TetOne-Puro（单质粒）、pLVX-TRE3G +  pLVX-Tet-On-Advanced（双质粒）

     慢病毒四环素诱导干扰质粒：Tet-pLKO-Puro

     慢病毒四环素诱导敲除质粒：pCW-Cas9

4、慢病毒基因敲除质粒：pLentiCRISPR V2

二、腺病毒载体

     表达质粒：pDC316

     干扰质粒：pDC316-ZsGreen1-shRNA

     包装质粒：pBHGlox(delta)E13Cre

三、腺相关病毒载体

     表达质粒：pAAV-MCS

     干扰质粒：pAAV-ZsGreen1-shRNA

     包装质粒：pAAV-RC、pHelper

六、植物表达质粒

     1、农杆菌介导载体：pBI121

     2、瞬时转化载体：pBI221

细菌互补质粒：pUC19-pJ23119-MCS

新冠病毒科学研究质粒：

pUC57-M(SARS-CoV-2)
pUC57-ORF8(SARS-CoV-2)
pCDNA3.1-Spike(SARS-CoV-2)-3×FLAG
pUC57-E(SARS-CoV-2)
pUC57-CDC-Positive-V2(SARS-CoV-2)
pUC57-ORF3(SARS-CoV-2)
pFastBac1-NSP12(SARS-CoV-2)
pCDNA3.1-N(SARS-CoV-2)-3×FLAG
pUC57-ORF7(SARS-CoV-2)
pCMV-Tag4A-ORF6(SARS-CoV-2)
pCMV-Tag4A-ORF7(SARS-CoV-2)
pCMV-Tag4A-ORF3a(SARS-CoV-2)
pCMV-Tag4A-ORF8(SARS-CoV-2)
pUC57-ORF6(SARS-CoV-2)
pUC-WHO-ORF1ab-Positive(SARS-CoV-2)
pCDNA3.1-nCoV19-E-part(SARS-CoV-2)
pCDNA3.1-3×FLAG-Spike(SARS-Cov-2)
pEnCMV-RBD(SARS-Cov-2)-3×FLAG
pCDNA3.1(+)-2019-HnCoV-Spike(SARS-Cov-2)
pLVX-3×FLAG-Spike(SARS-Cov-2)-Puro
pEGFP-N1-3×Linker-E(SARS-CoV-2)
pCDNA3.1-Spike(SARS-Cov-2)
pEGFP-N1-3×Linker-M(SARS-CoV-2)
pEGFP-N1-3×Linker-N(SARS-CoV-2)
pEGFP-N1-3×Linker-Spike(SARS-CoV-2)
pCDNA3.1-RBD(SARS-Cov-2)-EGFP
pCDNA3.1-Mem-S1(SARS-CoV-2)
pET28a-M(SARS-CoV-2)
pET28a-E(SARS-CoV-2)
pET28a-Spike(SARS-CoV-2)
pET28a-N(SARS-CoV-2)
p21549 pET28a-NSP8(SARS-CoV-2)
pET28a-NSP5(SARS-CoV-2)
pET28a-NSP7(SARS-CoV-2)
pET28a-ORF3A(SARS-CoV-2)
pET28a-NSP1(SARS-CoV-2)
pET28a-NSP13(SARS-CoV-2)
pDONR207 SARS-CoV-2 NSP3
pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-NSP12-2xStrep-IRES-Puro
pET28a-NSP13(SARS-CoV-2)
pET28a-NSP1(SARS-CoV-2)
SARS-CoV-2 S HexaPro
pML-T7-6×His-E(SARS-CoV-2)-6×His
pML-T7-6×His-NSP13(SARS-CoV-2)-6×His
pML-T7-6×His-ORF3A(SARS-CoV-2)-6×His
pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-N-2xStrep-IRES-Puro
pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-nsp1-2xStrep-IRES-Puro
pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-E-2xStrep-IRES-Puro
pLVX-EF1alpha-SARS-CoV-2-orf6-2xStrep-IRES-Puro
pCDNA3.1(+)-2019-HnCoV-Spike(SARS-Cov-2)

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