海洋弧菌基因敲除的自杀质粒 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

海洋弧菌基因敲除的自杀质粒

一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其构建方法，并提供了其在弧菌基因敲除中的应用方法。基因敲除自杀载体pLP12，为环状载体，包括PBAD启动子、阻遏蛋白基因araC、RP4转移起始位点、氯霉素抗性基因、R6K复制起始位点、多克隆位点区和致死基因vmi480，所述的多克隆位点区至少包含两个AhdI酶切位点，自杀载体pLP12经AhdI酶切后形成线性化自杀载体pLP12T。本发明的基因敲除自杀载体中采用了全新的反向选择基因vmi480，用于替代常用的sacB基因。pLP12T携带外源片段通过接合方式转移到待突变弧菌细胞，在抗生素以及反向选择致死基因vmi480产物压力下，弧菌先后发生第一次同源重组和第二次同源重组，最终产生目的基因缺失突变株。

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