HiExpress pGP3抗体稳转表达载体质粒 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

HiExpress pGP3抗体稳转表达载体质粒

pGP3是采用著名的GS基因作为选择基因（Selection Marker）构建的适用于多种哺乳动物细胞的高表达载体。
GS系统是由Lonza首先开发成功的利用GS基因作为筛选标记获取高表达哺乳动物细胞系的载体系统。该系统的出现解决了经典DHFR系统的缺陷，使得获得高表达细胞株不是那么难以实现的工作。
GS基因是可催化以glutamate和氨为底物合成谷氨酰胺的过程，methionine sulphoximine (MSX)可特异性抑制该酶的活性。
某些哺乳动物细胞系，例如小鼠NS0，本身不表达GS。因此，如果培养基中不加入谷氨酰胺则细胞不能存活。对这种细胞来说，GS基因可以作为筛选标记。有些细胞，例如CHO K1有内源GS的表达。如果用加入足以完全抑制GS基因表达的MSX且不含谷氨酰胺的培养基培养该细胞，即可造成有效选择压力。 二、结构特征：


为使用户使用方便，研发者给该系统赋予了如下结构特征：
双表达框：采用双表达框结构，参照多家国际著名公司用于工业规模生产抗体所用的表达载体的结构，综合各自的优点，设计了hCMV MIE启动子驱动的双表达框；5’-不翻译区：为提高表达能力，根据国际上对哺乳动物细胞表达机理等的相关研究成果，对上述两个表达框的5’-不翻译区进行了改造；对终止信号进行了优选；
一、系统特点： 三、表达系统组成：
该系统主要对5’-端不翻译区进行了优化，植入了可显著增强基因表达的调控元件。与DHFR系统相比，有如下优势：
筛选时重组细胞和非重组细胞对筛选剂MSX的敏感程度比DHFR系统差异明显，筛选过程中两类细胞的表现非常“sharp”；
高表达细胞出现比例较高；
本系统筛选周期进一步缩短，一般在6-8周即可获得高达量超过20pcd的稳转细胞系（库）。国际上用该系统开发的细胞系有超过100pcd的案例。
如同DHFR系统，GS系统也具有“Amplification”功能，必要时可进行梯度加压选择从而通过增加目的片段的拷贝数来提高表达水平。但加压选择的在很多情况下不是必须的，即使需要，也不像DHFR系统那样需要长时间的加压选择。
本系统只需从几千个细胞中即可获得有中试价值的高表达细胞株，不需要动用流式细胞仪等大型设备。
以制药工业广泛使用的CHO-K1或NS0为受体细胞，可以容易地获得培养基供应、工艺开发等方面的技术支持。与Lonza的GS系统相比，pGP3系列（包括pGP3、pGP3Due和pGP3Con）具有如下优点：
表达潜力更高：
目的基因由强启动子驱动；
启动子强度有效平衡；
Kozak、5’-和3’-不翻译区等进行了优化；
一段很小的5'-不翻译区优化后具有很高的活性，载体大小只有6.5kb，但Lonza的GS有10kb。
筛选更有效，更“sharp”：
GS基因由一个高度弱化的启动子驱动，筛选更有效，更“sharp”。 说明书及操作指南研发者20年治疗性抗体开发经验及工业级高表达载体开发经验的技术支持；pGP3表达载体；pGFPq，带有GFPq的真核表达载体，可用于转染和筛选过程的检测；CHO K1细胞系：本载体系统的受体细胞，可以用于构建高表达细胞株。用户可根据实际需要选择以下两种细胞之一种：                     （1）cGMP Bank记录的细胞系，或
                    （2）无cGMP Banking记录的细胞系
四、适用场合
国际上对GS系统的大规模工业应用十分成功，证明该系统是比较理想的大规模生产抗体等高附加值产品的载体系统。
适用于对表达量有较高要求的项目或项目阶段，包括需要克级至公斤级生产量的项目直至大规模生产的项目，从新药的前期研究、中试生产直至大规模生产。对表达量有较高要求的项目或项目阶段，包括需要公斤级甚至更大规模量的项目。

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