INVSc1 Competent Cells BioVectorTM酿酒酵母表达宿主菌化学感受态细胞-BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

INVSc1 Chemically Competent Cells

Cat No.: BioVector-924876

产品规格

BioVector^TMINVSc1 Competent Cells:                                      100μl/支              保存：-80℃（3个月）

pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                              10μl               保存：-80℃（12个月）

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存：-20℃（12个月）

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存：    4℃（12个月）

基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52

产品说明

BioVector^TMINVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母，pYES2质粒与BioVector^TM INVSc1酵母配套使用，激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。BioVector^TM INVSc1为合子型，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BioVector^TM INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板进行筛选。BioVector^TM INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取100 µl冰上融化的BioVector^TM INVSc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100℃，5 min，快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH₂O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。

4. ddH2O 50 µl重悬，涂质粒筛选用：SD-U medium板，29℃培养48-96 h。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. INVSc1酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

● 培养基配制

① 质粒筛选用：SD-U medium (1L):

Yeast Nitrogen base 6.7g

葡萄糖20g

Dropout （即 DO Supplement –Ura）适量（按说明书）

补水到1L，调 PH 至 5.8；

Agar 20g(for plates only)

121℃，15 min 高压灭菌。

② 蛋白诱导用：Induction Medium SD-U (1L):

Yeast Nitrogen base 6.7g

Dropout （即 DO Supplement –Ura） 适量（按说明书）

补水到800ml，调 PH 至 5.8，121℃，15 min 高压灭菌；

待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的 carbon source：100 ml 20% 半乳糖，100 ml 10% 棉子糖。