pET28a-FEN1-Fok1 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

pET28a-SGN plasmid

pET28a-SGN基因编辑质粒结构引导的核酸内切酶技术SGN(structure-guided endonuclease)，SGN不受靶标序列限制。SGN中包含识别3’flap结构的内切酶FEN-1(flapendonuclease-1)和能够切割DNA链的Fok I (Fn1) 的切割结构域，人工合成的引导DNA(guide DNA)能够和靶标序列形成3flap结构，该结构被SGN识别并结合后，SGN就可以对任何想要进行编辑的靶标DNA进行剪辑。

Map图谱：

FEN1（flap endonuclease-1）是一种识别3’ flap结构的内切酶。研究人员将FEN1与Fn1（Fok I）的剪切结构域结合起来，制造了结构引导的DNA编辑工具——SGN。SGN（structure-guided endonuclease）能够识别靶序列与向导DNA（gDNA）形成的3’ flap结构，通过Fn1二聚化对靶序列进行切割。研究显示，一对gDNA可以引导SGN在斑马鱼胚胎的基因组中正确切割报告基因和内源基因。这项研究指出，SGN能特异性识别和捕获目标，准确切割任何DNA序列。

SGN技术巧妙地融合FEN1（Flap endonuclease-1，是一种可以特异性识别flap结构的核酸内切酶，参与DNA的复制，修复和重组过程；除此之外它还具有双链DNA特异的5 -3 的核酸外切酶活性）和已经被成功用于ZFN和TALEN的DNA剪切结构域Fok I，结合标准化的linker（GS repeats），设计了一个chimeric protein，实现了可编程的基因编辑系统，具有以下特点：短链ssDNA导向的基因组特定位置；编辑结果是产生大片段的deletion（可以大于2.6kb）；可以在斑马鱼胚胎中成功编辑内源基因。

结构引导的核酸内切酶技术SGN(structure-guided endonuclease)这一新方法的突破在于，不同于以往的ZFN,TALEN, CRISPR-Cas, 甚至NgAgo等技术，SGN不受靶标序列限制。SGN中包含识别3’flap结构的内切酶FEN-1(flapendonuclease-1)和能够切割DNA链的Fok I (Fn1) 的切割结构域，人工合成的引导DNA(guide DNA)能够和靶标序列形成3’flap结构，该结构被SGN识别并结合后，SGN就可以对任何想要进行编辑的靶标DNA进行剪辑。

推测SGN产生大片段DNA删除的机制(Xu et al.,2016 [6])在GenomeBiology同期配发的ResearchHighlight[7]中，NIH的Shawn MBurgess教授总结了SGN的三个关键特征，
1.FEN-1与FokI切割结构域形成的融合蛋白（SGN）可以通过利用DNA寡聚体（向导DNA）去靶向突变特定基因位点。
2. 这种靶向突变方式倾向于产生大片段DNA的删除，删除片断可达几百至几千个碱基对。
3.SGN在斑马鱼胚胎中已显示出效果，表明这种基因编辑技术在模式动物中具备可行性。Burgess教授还宣称[7]，在基因编辑上，SGN是一个令人激动的新选择，因为SGN非常灵活、简便，并且具有删除大片段DNA的潜力。这对于想要通过灭活某个基因以达到基因治疗或遗传改良效果的研究者来说，无疑是一大喜讯。此外，大片段DNA删除还可以防止在研究中出现的假阴性。

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