BioVector® Bhas 42 转化试验细胞系 / BioVector® Bhas 42 Transformation Assay Cell Line

通用定义 / General Definition:BioVector® Bhas 42 是一种高度特异性的重组细胞系，专门用于体外评估化学物质的致癌性（Carcinogenicity）。该细胞系由日本学者通过将激活型的人源 v-Ha-ras 癌基因转染到小鼠成纤维细胞系 BALB/c 3T3 中克隆建立。Bhas 42 细胞在未受刺激时表现为接触抑制的单层生长，但在接触到环境致癌物或促癌剂后，会失去接触抑制并形成肉眼可见的、三维堆叠的转化灶（Foci）。由于其体内已整合了 ras 基因，它对启动型致癌物（Initiators）和促癌型致癌物（Promoters）均高度敏感，因此被国际经合组织（OECD）正式推荐用于替代传统动物致癌试验的体外替代方法。

BioVector® Bhas 42 is a specialized recombinant cell line designed for in vitro carcinogenicity testing and cell transformation assays (CTA). It was established by transfecting the activated human v-Ha-ras oncogene into the mouse embryonic fibroblast line BALB/c 3T3. In their basal state, Bhas 42 cells grow as a contact-inhibited, flat monolayer. However, upon exposure to carcinogenic initiators or tumor promoters, they lose contact inhibition and develop morphologically altered, multilayered transformation foci. Because they already harbor an initiated ras oncogene, Bhas 42 cells bypass the initial genetic mutation requirement for certain assays, responding rapidly to both initiating and promoting stimuli. This line is officially recognized by OECD guidelines as a validated non-animal alternative for predicting chemical carcinogenicity.

BioVector® Bhas 42 技术参数 (Technical Specifications)

1. 细胞与分子生物学特征

• 组织来源： 小鼠胚胎成纤维细胞（BALB/c 3T3 衍生物）。

• 形态特征： 基础状态下为成纤维细胞样（Fibroblast-like），贴壁生长。

• 转化表型： 当细胞汇合度达到 100% 后，正常细胞停止分裂。若加入促癌物，细胞会发生形态学改变，表现为细胞嗜碱性增强、排列紊乱、互相交织堆叠，形成明显的转化灶。

• 基因特征： 稳定整合了人 v-Ha-ras 基因。该基因的预先存在使细胞处于“已被启动（Initiated）”的癌变初级阶段。

2. 培养与试验条件

• 生长培养基（维持状态）： BioVector® MEM 培养基，添加 10% 优质胎牛血清 (FBS) 和 1% 青霉素/链霉素。

• 试验专用培养基（关键）： 进行转化试验（Foci Assay）时，通常需要切换到 DF5 培养基（DMEM 与 F12 按 1:1 混合，添加 5% 特选胎牛血清）。血清的质量和浓度对维持背景细胞的接触抑制和促进转化灶的形成至关重要。

• 培养环境： 37 摄氏度，5% 二氧化碳。

• 传代策略：

  重要： 必须在细胞汇合度达到 70% 到 80% 之前进行传代，绝对不能让细胞长满（过密）。如果细胞频繁长满，其自发转化率会剧烈上升，导致试验背景过高而失效。

主要科研应用 (Research Applications)

1. 预测化学品致癌性 (Bhas 42 Cell Transformation Assay, CTA)

• 启动剂试验 (Initiation Assay)： 检测待测物是否能诱导细胞发生基因突变，与 ras 协同导致转化。

• 促癌剂试验 (Promotion Assay)： 专门用于筛查非基因毒性致癌物（Non-genotoxic Carcinogens）。这是传统 Ames 试验等细菌突变实验无法检测的盲区。Bhas 42 是目前公认最敏感的体外促癌剂筛查模型。

2. 环境毒理学与消费品安全评估

• 替代动物实验： 用于农药、化妆品、医药中间体及食品添加剂的早期安全评价，符合国际 3R 原则（减少、替代、优化）。

实验操作注意事项 (Experimental Guidelines)

• 血清批号筛选： 转化试验对胎牛血清的要求极其苛刻。不同批次的血清可能导致自发转化灶过多，或完全抑制阳性对照（如 MCA 或 TPA）的转化。建议在正式试验前进行血清批次敏感性验证。

• 接种密度控制： 转化试验对起始接种细胞数要求非常精准（例如在 6 孔板中通常每孔接种 2000 到 4000 个细胞），接种不均会导致后期局部的假阳性堆叠。

• 结果判读： 试验周期通常为 21 天，终点采用甲醇固定并用吉姆萨（Giemsa）或结晶紫染色，随后在显微镜下根据 OECD 标准（灶体大小、细胞重叠度、嗜碱性）对转化灶进行人工或智能计数。

技术指标 (Technical Data Summary)

注意 / Note: Bhas 42 试验的最大优势在于其周期（约 3-4 周）远短于传统的两年期小鼠致癌试验，且能够敏感地捕捉到非基因毒性的促癌风险，在制药和化工行业的新药早期毒性防御中应用极广。

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