BioVector® CHM13hTERT 人纯合葡萄胎永生化工程细胞株 / BioVector® Human CHM13hTERT Homozygous Hydatidiform Mole Cell Line

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® CHM13hTERT 人纯合葡萄胎永生化工程细胞株 (BioVector® Human CHM13hTERT Homozygous Hydatidiform Mole Immortally Transduced Cell Line)。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Alternative Line Designations)：

  • CHM13-hTERT Reference Strain

  • CHM13 T2T Genome Source Line

  • BioVector® CHM13hTERT Haploid-Derived Diploid Baseline

  • CHM13 Immortalized Hydatidiform Mole

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：人（Homo sapiens），来源于人完全性完全纯合葡萄胎（Complete Hydatidiform Mole, CHM13）组织，由单个精子受精后基因组自倍增形成，通过端粒酶逆转录酶（hTERT）慢病毒转导建立的永生化细胞株。

• 基因型与表型指纹 (Genotype & Phenotypic Fingerprint)：核心基因组特征为 46,XX 单倍体衍生纯合二倍体（Effectively Monoclonal/Haploid-derived Duplicate）；作为端粒到端粒联盟（T2T Assembly Consortium）完成首个人类全基因组无缝隙组装（T2T-CHM13）的绝对物理源头，全基因组极度缺乏杂合性（Zero Heterozygosity），具备极高的基因组稳定性。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：成纤维细胞样（Fibroblast-like），贴壁生长（Adherent）。细胞呈扁平梭形伸展，排列紧密且具接触抑制特性，倍增时间约 24-32 小时；极低代次下展现出接近正常原代成纤维细胞的核型稳定性。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，基因组学研究、T2T 测序校准、CRISPR 基因编辑精准敲入评估及结构变异基准分析专用）。

2 分子基因组学特征与 T2T 全基因组测序/结构变异（SV）及基因编辑校准模型价值 / Genomic Dynamics and T2T Reference Benchmark Models

BioVector® CHM13hTERT 细胞株是人类基因组学与长读长测序（PacBio HiFi / Oxford Nanopore）技术中公认的“金标准物理基准参照株”：

The BioVector® CHM13hTERT cell line functions as the ultimate physical reference standard for human genomics, long-read sequencing technology benchmarking, structural variant mapping, and precision CRISPR-Cas editing:

纯合二倍体结构与 T2T 测序无缝组装 (Homozygous Genomic Architecture & T2T Sequencing Standard)

作为彻底消除等位基因杂合干扰（Allelic Heterozygosity）的极端基因组底盘，该细胞在分子遗传层面展现出无可替代的基准指纹：

• 零杂合度基因组底盘 (Near-Zero Heterozygosity)：因其源于单个精子自倍增，其染色体（除了极微小的自发突变外）两套拷贝完全一致。彻底消除了长读长测序组装时单倍型（Haplotype）分型混淆的问题，是解析高度重复序列（如着丝粒、端粒及核糖体 DNA）的唯一理想物理标准。

• CRISPR 双等位基因精准敲入模型 (Biallelic Knock-in & SV Benchmark)：在进行基因编辑（如 Prime Editing 或 HDR 修复）时，由于靶位点序列完全对称纯合，能够提供高度可预测的切割与同源重组修复动力学。(Maintains a near-zero heterozygosity genome that serves as the foundation for the landmark T2T-CHM13 human reference assembly, offering an unparalleled platform for structural variation discovery and precise gene editing assays.)

3 细胞完全培养基配方与无血清/低血清传代栽培规范 / Routine Culture and Maintenance Formulations

核心红线规程 / Slow Growth Rate & Non-Cancerous Handling Notice

CHM13hTERT 虽然经过 hTERT 永生化，但仍保持非肿瘤细胞的生长特性，贴壁较紧且对过度消化与过度稀释接种极度敏感。日常传代绝对不能使用高比例稀释（推荐传代比例 1:2 至 1:4），且必须使用低浓度温和胰酶；切勿让细胞生长密度低于 20% 或高于 80%，密度过低会导致细胞停止增殖并出现早期衰老特征。(Cultivate strictly using specialized BioVector® Fibroblast Media; avoid over-trypsinization and overly sparse seeding densities to prevent growth arrest.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质完全培养基 (BioVector® Complete DMEM/F12 Medium for CHM13hTERT)：

  • BioVector® DMEM/F12 1:1 Base（DMEM/F-12 基础培养基）：84%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清，经热灭活）：15%

  • BioVector® Certified Penicillin-Streptomycin（优质双抗补剂）：1%

  • (可选补充)BioVector® Non-Essential Amino Acids（非必需氨基酸，100X）：1%

• 2. 辅助细胞消化与洗涤液 (Cell Harvest Reagents)：

  • BioVector® Gentle Trypsin-EDTA Digest Solution（温和胰酶消化液，0.05% Trypsin + 0.02% EDTA）

  • BioVector® Sterile Phosphate Buffered Saline（无菌 PBS 洗涤液）

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：标准恒温加湿培养箱，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 ($\text{CO}_2$)。

4 细胞冻存管复苏、传代培养与超低温冻存工作流 / Thawing, Passage, and Cryopreservation Workflows

A 阶段：细胞冻存管的快速复苏启动 / Phase A: Thawing & Primary Seeding

1. 从零下 196 摄氏度液氮罐中移出 BioVector® CHM13hTERT 细胞冻存管，立刻放入 37 摄氏度水浴 中快速摇晃融化（2 分钟内）。

2. 在无菌超净台内，将融化的细胞悬液转移至含 5 mL 预热 BioVector® Complete DMEM/F12 Medium 的 15 mL 离心管中。

3. 1,000 rpm（约 $180\times g$）轻柔离心 4 分钟，吸弃含 DMSO 的冻存上清。

4. 加入 5 mL 新鲜完全培养基重悬细胞，接种至 T25 培养瓶中，放入 37 摄氏度、5% $\text{CO}_2$ 孵箱中培养过夜。

B 阶段：日常传代与消化操作 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代。

2. 吸弃旧培养基，用 BioVector® PBS 洗涤液 极其轻柔地清洗细胞层 1 次。

3. 加入 1 mL BioVector® Gentle Trypsin-EDTA Solution，室温或 37 摄氏度孵箱温育 2-4 分钟，显微镜下观察细胞收缩变圆后立即加入 3 mL 预热完全培养基终止消化。

4. 沿瓶壁轻柔吹打细胞，按 1:2 至 1:4 的比例（接种密度不低于 $2\times 10^4 \text{ cells/cm}^2$）转接至新培养瓶中继续培养。

C 阶段：高存活率超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集处于对数生长盛期（融合度约 75%-80%）的 CHM13hTERT 细胞。

2. 使用 BioVector® High-Recovery Cell Cryopreservation Medium（高复苏无血清细胞冻存液） 重悬细胞，调整密度至 $1\times 10^6 \text{--}3\times 10^6 \text{ cells/mL}$。

3. 分装至无菌冻存管中，使用程序降温盒置于零下 80 摄氏度冰箱冷冻过夜，随后转入 液氮罐（零下 196 摄氏度） 长期保存。

5 支原体/STR鉴定与纯合单倍型基因组测序（SNP 杂合率 $<0.01\%$）一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

支原体与人类 STR 基因同源性常规筛查 (Contamination & Lineage Identity Surveillance)

CHM13hTERT 作为基因组基准细胞，极易因其他人类肿瘤细胞（如 HeLa）的交叉污染而导致基因组杂合度失效。必须定期使用 BioVector® Mycoplasma PCR Detection Kit 筛查支原体；同时，定期使用 BioVector® Human STR Profiling Kit 验证 STR 位点（必须表现出特有的纯合单等位基因峰型特征）。

纯合单倍型测序杂合率（$\text{SNP Heterozygosity Rate} < 0.01\%$）一票否决制质控红线 (Homozygosity Fidelity Gatekeeper)

为了阻断由于长期连续体外传代导致基因组发生自发染色体倍性异常、杂合性丢失恢复（LOH 破缺）、或被外源杂合细胞系交叉污染致使全基因组测序校准实验彻底失效的灾难性后果，质控部门或研究人员必须在细胞建库与测序实验前，执行硬性的“纯合基因组 Fidelity”一票否决制质控：

1. STR 单峰纯合质控红线：全套 21 个标准人 STR 位点检测中，除了少数自发突变位点外，必须严格呈现单一等位基因峰（Homogeneous Single Peak），无双峰杂合特征。

2. 高通量测序 SNP 杂合率质控红线（核心考核）：对建库细胞进行浅层全基因组测序（WGS）或靶向 SNP Panel 测序，全基因组 SNP 杂合位点比例（Heterozygosity Rate）必须严格低于 $0.01\%$。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现杂合位点比例 大于或等于 $0.01\%$（提示存在杂合细胞混入或基因组重组），或出现多峰 STR 交叉污染（或检测出支原体阳性），该生产或实验批次细胞执行一票否决红线制，全盘作废彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将杂合度异常的细胞投入下游基因组组装或测序标定。必须立刻重新复苏原始极低代次的 BioVector® CHM13hTERT 种子细胞管，重新开启扩增与质控循环。(Enforce a rigid, non-negotiable functional gatekeeper: CHM13hTERT cell stocks must strictly verify an extremely low SNP heterozygosity rate ($<0.01\%$) via genome-wide profiling paired with single-peak homozygous STR identity. Any genomic cross-contamination or elevation in heterozygosity triggers an immediate system veto to destroy running cultures instantly.)

BioVector NTCC Inc.