BioVector® Ixodes scapularis ISE6 肩突硬蜱胚胎细胞株 / BioVector® Ixodes scapularis Embryonic Tick Cell Line ISE6

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® Ixodes scapularis ISE6 蜱虫细胞株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • ISE6 Tick Cell Line

  • Ixodes scapularis ISE6

  • BioVector® ISE6 Blacklegged Tick Vector Baseline

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：黑腿蜱/肩突硬蜱（Ixodes scapularis），来源于胚胎组织（Embryonic tissue），是国际公认的媒介节肢动物体外研究标准模型。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：呈现混合型上皮样/成纤维样（Epithelial-like / Fibroblast-like）与游走细胞样形态。半贴壁/松散贴壁生长（Semi-adherent），细胞常聚集成簇或形成单层网络，倍增时间相对较长（约 3–7 天）。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级或 2 级（BSL-1/BSL-2，取决于是否感染媒介传染性病原体；常用于莱姆病螺旋体 Borrelia burgdorferi、无形体 Anaplasma phagocytophilum 及立克次体 Rickettsia 等宿主-病原体相互作用研究）。

• 

2 分子媒介生物学与病原体培养价值 / Vector Biology and Pathogen Interaction Value

BioVector® ISE6 是研究节肢动物媒介传染病及病原体体外共培养的核心工具：The BioVector® ISE6 cell line provides a critical in vitro arthropod model for propagating tick-borne pathogens, studying vector-pathogen molecular interactions, and screening tick-targeted acaricides or transmission-blocking agents:

蜱传病原体体外共培养与免疫机制 (Pathogen Propagation & Vector Immunity)

• 病原体专性宿主 (Permissive Host for Tick-Borne Pathogens)：高度允许 Anaplasma phagocytophilum、Borrelia burgdorferi 及多种蜱传病毒（Tick-borne viruses）在细胞内或细胞外稳定复制。

• 蜱虫先天免疫研究 (Arthropod Innate Immunity)：用于转录组与 RNAi 基因沉默实验，解析蜱虫肠道及唾液腺免疫防御机制。(Serves as an essential platform for intracellular pathogen culturing, RNAi gene silencing, and vector-pathogen interface profiling.)

3 细胞完全培养基配方与低温无 CO₂ 培养规范 / Culture Formulations and Special Maintenance

核心红线规程 / Low Temperature & No-CO₂ Environment Notice

ISE6 属于变温节肢动物（蜱虫）细胞，培养条件与哺乳动物细胞截然不同。日常培养必须使用专门配制的 L15B 培养基（含特级胎牛血清、Tryptose Phosphate Broth 及脂质补充物）；培养箱温度必须严格控制在 32 摄氏度（或 28–34 摄氏度），且绝对禁止通入 $\text{CO}_2$（密闭培养瓶，无气体交换）。(Cultivate strictly in specialized L15B medium at 32 °C without $\text{CO}_2$; standard mammalian 37 °C / 5% $\text{CO}_2$ incubators will cause rapid cell death.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质 ISE6 专用完全培养基 (BioVector® L15B Complete Medium for ISE6)：

  • BioVector® L15B Modified Base Medium（L15B 改良基础培养基）：80%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清，经热灭活）：10%

  • BioVector® Tryptose Phosphate Broth (TPB)：5%

  • BioVector® Bovine Lipoprotein / Lipid Supplement（牛脂蛋白/脂质补充液）：5%

• 2. 传代与收集方式 (Gentle Cell Harvesting)：

  • 机械吹打脱落（Mechanical Scraping / Resuspension）：由于 ISE6 为松散贴壁，传代时严禁使用强效 Trypsin 消化，仅需使用移液器轻轻吹打培养瓶壁细胞层即可。

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：密封培养瓶（T25/T75 拧紧瓶盖），运行工作温度精密锁定在 32 摄氏度，0% 二氧化碳（无 $\text{CO}_2$ 加压）。

4 细胞复苏、吹打传代与超低温冻存工作流 / Thawing, Subculturing, and Preservation

A 阶段：细胞冻存管的解冻启动 / Phase A: Thawing & Seeding

1. 从 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐中移出 BioVector® ISE6 冻存管，置于 $32\text{--}37^\circ\text{C}$ 水浴中快速融化。

2. 将细胞悬液转移至含 5 mL 预热 BioVector® L15B Complete Medium 的离心管中。

3. $800\times g$ 轻柔离心 5 分钟，弃去含冻存液的上清。

4. 加入新鲜培养基重悬，接种至密闭 T25 培养瓶中，置于 $32^\circ\text{C}$ 无 $\text{CO}_2$ 培养箱 中培养。

B 阶段：日常传代与悬浮重悬 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞密度达到 $80\%\text{--}90\%$ 汇合度（或形成明显细胞团块）时进行传代（通常 7–14 天传代一次）。

2. 使用移液管吸取瓶内培养基，对贴壁细胞层进行温和吹打，使细胞完全脱落并分散。

3. 按 1:2 至 1:3 的比例 分瓶，补足新鲜 L15B 完全培养基，拧紧瓶盖继续培养。

C 阶段：超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集对数生长盛期的 ISE6 细胞，离心沉淀。

2. 使用 BioVector® Insect/Tick Cell Cryopreservation Medium（含 10% DMSO 及高浓度血清的 L15B 冻存液） 重悬，调整密度至 $5\times 10^6\text{ cells/mL}$。

3. 程序降温后保存于 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐 中。

5 种属 16S rRNA / COI 鉴定与无病原体（Pathogen-Free）一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

蜱虫物种鉴定与交叉污染筛查 (Species Identity Surveillance)

必须定期使用 BioVector® Tick Species PCR Kit 对 Ixodes scapularis 细胞的 COI 或 16S rRNA 基因进行测序比对，确保无昆虫（如 Aedes、Spodoptera）或哺乳动物细胞的交叉污染。

阴性无污染背景（Pathogen-Free & Mycoplasma Clean）一票否决制质控红线 (Biological Purity Gatekeeper)

为确保 ISE6 作为纯净“宿主细胞模型”投入实验，阻断由于细胞本身携带内源性/隐形病原体导致实验数据偏离的灾难性后果，必须执行硬性质控：

1. 物种同源性红线：DNA 测序结果必须 100% 匹配 Ixodes scapularis 基因组。

2. 病原体阴性质控红线（核心考核）：使用通用 PCR 筛查，细胞必须 100% 呈支原体（Mycoplasma）、立克次体（Rickettsia）及无形体（Anaplasma）阴性。

3. 一票否决处理规范：一旦发现内源病原体污染或培养条件漂移导致细胞大量死亡，该批次细胞执行一票否决红线制，彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟），并重新复苏原始极低代次的 BioVector® ISE6 种子冻存管。(Enforce a rigid functional gatekeeper: ISE6 tick stocks must strictly verify I. scapularis species identity paired with 100% pathogen-free and mycoplasma-negative purity. Any cross-contamination or internal pathogen load triggers an immediate system veto to destroy running lots instantly.)

BioVector NTCC Inc.

http://www.biovector.net