BioVector® RGM10742 大鼠正常胃粘膜上皮细胞株 / BioVector® RGM10742 Rat Normal Gastric Mucosal Epithelial Cell Line (RGM-1)

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® RGM10742 大鼠正常胃粘膜上皮细胞株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • RGM10742

  • RGM-1

  • BioVector® RGM-1 Rat Gastric Mucosa

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：大鼠（Rattus norvegicus），来源于正常大鼠胃粘膜上皮组织（Normal Rat Gastric Mucosa），是非肿瘤化的原代衍生上皮细胞模型。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：呈现典型的多角形上皮样形态（Epithelial-like）。完全贴壁生长（Adherent），细胞单层铺满时呈铺路石样（Cobblestone monolayer）排列，紧密连接结构清晰，倍增时间约为 24–36 小时。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，适用于消化道生理学、胃粘膜屏障功能、药物致胃损伤修复及抗溃疡药物筛选）。

2 消化道生理与胃粘膜保护机制研究价值 / Gastrointestinal Pathophysiology and Research Value

BioVector® RGM10742 是研究胃粘膜损伤修复与屏障防护的核心体外模型：

The BioVector® RGM10742 cell line serves as a standard non-transformed epithelial model for investigating gastric mucosal protection, acute damage repair mechanisms, and drug cytotoxicity evaluations:

胃粘膜屏障与药理毒理学应用 (Mucosal Barrier & Gastroprotective Screening)

• 急性胃粘膜损伤模型 (NSAID & Alcohol Damage Models)：广泛用于非甾体抗炎药（如阿司匹林、吲哚美辛）或乙醇诱导的细胞毒性及凋亡保护实验。

• 胃粘膜修复与细胞迁移 (Epithelial Wound Healing & Migration)：适合开展划痕创伤愈合（Scratch Assay）及前列腺素（PGE2）、生长因子对胃上皮修复的分子调控机制研究。(Provides a reliable in vitro platform for screening gastroprotective compounds, studying cellular restitution, and evaluating mucosal toxicity.)

3 细胞完全培养基配方与标准培养规范 / Culture Formulations and Maintenance

核心消化与操作规程 / Gentle Trypsinization & Density Notice

RGM10742 上皮细胞对胰酶过度消化较为敏感。消化时建议使用 0.25% Trypsin-EDTA 在 $37^\circ\text{C}$ 下处理 2–3 分钟，显微镜下观察到细胞收缩变圆即应立刻加入含血清培养基终止。日常培养切勿使细胞密度长期处于低于 20% 的极低状态，否则易导致生长停滞。(Avoid over-trypsinization; terminate digestion immediately upon cellular rounding to preserve apical membrane integrity.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质 RGM10742 完全培养基 (BioVector® DMEM/F12 Complete Medium)：

  • BioVector® DMEM/F-12 (1:1) 基础培养基：89%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清）：10%

  • BioVector® Penicillin-Streptomycin（双抗）：1%

• 2. 贴壁消化与传代试剂 (Subculture Reagents)：

  • BioVector® 0.25% Trypsin-0.02% EDTA Solution

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：透气培养瓶或 Petri 皿，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 ($\text{CO}_2$)。

4 细胞复苏、消化传代与超低温冻存工作流 / Thawing, Subculturing, and Preservation

A 阶段：细胞冻存管的复苏启动 / Phase A: Thawing & Seeding

1. 将 BioVector® RGM10742 冻存管从 $-196^\circ\text{C}$ 液氮中移出，迅速置于 $37^\circ\text{C}$ 水浴中摇晃融化（1–2 分钟）。

2. 将细胞悬液吸入含 5 mL 预热完全培养基的离心管中，$1000\text{ rpm}$（约 $200\times g$）离心 5 分钟。

3. 弃去上清液，加入 5 mL BioVector® DMEM/F12 Complete Medium 重悬细胞，接种至 T25 培养瓶，置于 $37^\circ\text{C}$、$5\%\ \text{CO}_2$ 培养箱中。

B 阶段：日常消化传代 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞贴壁密度达到 $80\%\text{--}90\%$ 汇合度 时进行传代。

2. 吸弃旧培养基，用无菌 PBS 缓冲液洗涤 1–2 次。

3. 加入 1 mL BioVector® 0.25% Trypsin-EDTA，$37^\circ\text{C}$ 消化 2 分钟，加入 3 mL 完全培养基终止消化。

4. 轻轻吹打成单细胞悬液，按 1:3 至 1:5 的比例 分瓶继续培养（每周传代 2–3 次）。

C 阶段：超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集对数生长期的细胞，离心沉淀。

2. 使用 BioVector® Cell Cryopreservation Medium（含 90% 完全培养基 + 10% DMSO） 重悬细胞，控制密度至 $1\times 10^6\text{ cells/mL}$。

3. 放入程序降温盒置于 $-80^\circ\text{C}$ 过夜，随后转入 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐 长期保存。

5 上皮标志物表达（阳性率 $\ge 95.0\%$）与无污染一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

物种同源性与细胞鉴定 (Species & Lineage Authentication)

定期采用 BioVector® Rat STR Profile Kit 验证大鼠基因组特征，并通过免疫荧光或 Western Blot 确认细胞表达 Cytokeratin 18/19（角蛋白） 及 E-cadherin（E-粘附蛋白），确保其上皮特异性。

上皮纯度与无支原体污染（阳性率 $\ge 95.0\%$）一票否决制质控红线 (Purity & Quality Gatekeeper)

为防止 RGM10742 发生成纤维细胞过度生长转化（EMT 漂移）或隐形污染导致胃粘膜损伤实验出现假阳性结果，质控流程执行硬性质控指标：

1. 物种同源红线：STR 鉴定及 PCR 扩增必须 100% 确认大鼠（Rattus norvegicus）源性，无小鼠或人源细胞交叉污染。

2. 上皮标志物纯度质控红线（核心考核）：通过流式细胞术（FACS）检测，RGM10742 上皮特异标志物 Cytokeratin 阳性率必须严格大于或等于 $95.0\%$，且 无支原体（Mycoplasma）、细菌及真菌污染。

3. 一票否决处理规范：若纯度检测显示 Cytokeratin 阳性率 跌破 95.0% 门槛线 或检出支原体污染，该批次细胞执行一票否决红线制，彻底高压灭菌销毁，并重新复苏原始 BioVector® RGM10742 种子冻存管。(Enforce a rigid functional gatekeeper: RGM10742 cell lots must strictly verify rat species identity, zero mycoplasma contamination, paired with an epithelial Cytokeratin positive rate $\ge 95.0\%$. Any marker loss or cross-contamination triggers an immediate system veto to destroy running lots instantly.)