BioVector® INS-1 832/13 大鼠胰岛素瘤细胞株 / BioVector® INS-1 832/13 Rat Insulinoma Cell Line

背景与来源说明 / Context & Provenance: INS-1 832/13 细胞株是由 Duke 大学 Christopher Newgard 实验室基于原始大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）通过稳定转染人原胰岛素（Human Proinsulin）基因筛选重构获得的胰岛 beta 细胞模型。相比于原始 INS-1 或 MIN6 细胞，INS-1 832/13 具有极佳且稳定的葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）生理响应度（2.5 mM 至 15 mM 葡萄糖刺激下胰岛素分泌可达 6-10 倍增加），是目前糖尿病发病机制、胰岛功能评估、高糖毒性以及降糖药物高通量筛选（HTS）的标准细胞模型。

细胞生物学特征与核心参数 / Biological Characteristics

• 组织来源：大鼠（Rattus norvegicus）胰腺胰岛 beta 细胞衍生（X射线诱导大鼠胰岛素瘤）

• 生长特性：贴壁生长（Adherent），多角形或短梭形，易成簇聚集生长

• 葡萄糖响应（GSIS）特性：

  • 基础状态（Low Glucose）：2.5 mM 葡萄糖下保持较低的基线胰岛素分泌。

  • 刺激状态（High Glucose）：15 mM - 16.7 mM 葡萄糖刺激下，胰岛素分泌显著提升 6 - 10 倍。

  • 分泌产物：同时分泌大鼠内源胰岛素及重组表达的人胰岛素（可以使用人胰岛素 ELISA 特异性检测）。

• 推荐代数范围：建议在 P20 - P40 代以内进行 GSIS 及功能性实验，高代数（> P50）可能导致葡萄糖响应性逐渐衰减。

培养条件与传代指南 / Cultivation & Subculture Guidelines

1. 完全培养基配方（Complete Growth Medium）

INS-1 832/13 对培养基组分极其敏感，特别是 2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol）为维持其生理功能及生存必需成分：

• 基础培养基：RPMI-1640（含 11.1 mM D-葡萄糖）

• 血清添加：10% 优质胎牛血清（FBS，建议热灭活）

• 关键添加剂：

  • 2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol）：50 µM（必需添加，防止细胞氧化应激）

  • 丙酮酸钠（Sodium Pyruvate）：1 mM

  • HEPES：10 mM

  • L-谷氨酰胺（L-Glutamine）：2 mM

  • 双抗（Penicillin-Streptomycin）：100 U/mL 青霉素 + 100 µg/mL 链霉素

2. 培养环境与传代操作

• 培养条件：37°C，5% CO2，高湿度培养箱。

• 传代比例与密度：1:3 至 1:4 传代，当细胞密度达到 70% - 80% 时即可传代（避免生长过满造成功能退化）。

• 消化消化规范：使用 0.25% Trypsin-EDTA 消化 2-3 分钟，显微镜下观察细胞变圆后立即加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打形成单细胞悬液。

技术指标简表 / Technical Summary

BioVector® INS-1 832/13 Rat Insulinoma Cell Line Profile

General Overview

The INS-1 832/13 cell line is a genetically engineered subclone derived from the parental INS-1 rat insulinoma cell line by stable transfection with a human proinsulin gene under the control of the cytomegalovirus (CMV) promoter. Engineered in the laboratory of Dr. Christopher Newgard, INS-1 832/13 exhibits highly reproducible Glucose-Stimulated Insulin Secretion (GSIS) within the physiological glucose range, overcoming the blunted glucose responsiveness typical of long-term wild-type INS-1 passages.

Technical & Functional Specifications

1. Key Physiological Features

• Robust GSIS Response: Displays a steep 6- to 10-fold increase in insulin secretion when shifted from basal (2.5 mM) to stimulatory (15 mM) glucose concentrations.

• Dual Insulin Secretion: Produces and secretes both endogenous rat insulin and human insulin, enabling accurate quantification using human-specific insulin ELISA assays.

• Metabolic Platform: High expression of GLUT2 and Glucokinase (GK), preserving the physiological glucose-sensing cascade (ATP/ADP ratio increase → K-ATP channel closure → Membrane depolarization → Ca2+ influx → Exocytosis).

2. Culture & Assay Conditions

• Basal Medium: RPMI-1640 (containing 11.1 mM D-glucose).

• Supplements: 10% Fetal Bovine Serum (FBS), 10 mM HEPES, 1 mM Sodium Pyruvate, 2 mM L-Glutamine, and 50 µM 2-Mercaptoethanol (critical reducing agent for cell viability).

• Culture Environment: 37°C in a humidified 5% CO2 atmosphere.

• Passage Limits: Recommended for functional assays between passage 20 and passage 40.

Primary Research Applications

1. High-Throughput Screening (HTS) for Antidiabetic Therapeutics

   • Screening small molecules, peptide mimetics (GLP-1R agonists), and natural products that enhance glucose-dependent insulin secretion.

2. Beta-Cell Dysfunction & Glucolipotoxicity Models

   • Modeling beta-cell stress, apoptosis, and mitochondrial dysfunction induced by chronic high glucose (25 mM) and free fatty acids (e.g., palmitate).

3. Gene Function & Pathway Validation

   • Investigating target gene knockdown/overexpression impacts on insulin synthesis, vesicle trafficking, and stimulus-secretion coupling.

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

E-mail:BioVector@163.com

网址http://www.biovector.net