BioVector® MUTU-III 细胞株 / MUTU-III Cell Line

一、 背景与来源说明 / Background & Origin

MUTU-III（常写作 MUTU 3 或 Mutu-3）是一种来源于人类地方性 Epstein-Barr 病毒（EBV）阳性伯基特淋巴瘤（Burkitt Lymphoma, BL）的 B 淋巴细胞株。

MUTU 系列细胞株建立自同一名携带 $t(8;14)$ 染色体易位的男性 BL 患者活检组织（MUTU-BL）的连续传代克隆。其中，MUTU-III 属于 EBV 潜伏期 III 型（Latency Type III）表现型克隆，高表达全套 EBV 潜伏期蛋白（包括 EBNA1、EBNA2、EBNA3 系列、EBNA-LP 以及 LMP1、LMP2 等）及相关微 RNA（ebv-miR-BHFR1-2-3p）。与之相对的姐妹克隆 MUTU-I 保持潜伏期 I 型（仅表达 EBNA1）。该细胞株是研究 EBV 潜伏期类型转换、致瘤机制、EBV 编码蛋白（如 LMP1/EBNA2）信号通路及 B 细胞淋巴瘤免疫逃逸的经典细胞模型。

二、 细胞生物学特征 / Biological Characteristics

• 物种与来源 / Taxonomy & Source：人（Homo sapiens），B 淋巴细胞，伯基特淋巴瘤（Burkitt Lymphoma）

• 生物安全等级 / Biosafety Level：BSL-2（EBV/HHV-4 阳性，具有潜在裂解感染可能，需在二级生物安全柜中操作）

• 生长特性 / Growth Properties：悬浮生长（Suspension），常呈团块状或单细胞悬浮，培养基中可见少量细胞碎片

• 表型与基因特征 / Phenotypic & Genetic Markers：

  • 表面标记：CD19(+)、CD20(+)、CD37(+)、CD38(+)、CD80(+)、HLA-DR(+)、cyCD79a(+)

  • 遗传变异：携带 $t(8;14)$ 易位及 MYC 基因突变（p.Thr73Asn）

  • 病毒特征：EBV 阳性（潜伏期 III 型，高表达 EBNA2、LMP1 等蛋白）

• 主要应用 / Key Applications：EBV 潜伏与裂解周期调控机制研究、LMP1/EBNA2 致瘤信号通路、淋巴瘤免疫治疗 target 筛选、EBV 相关淋巴瘤药效学评估

三、 培养条件与传代指南 / Culture & Handling Protocols

1. 推荐培养基 / Complete Growth Medium

• 基础培养基：RPMI-1640

• 添加成分：10% 至 20% 灭活胎牛血清（FBS） + 1% 双抗（Penicillin-Streptomycin，可选）

• 培养环境：37 摄氏度，5% $CO_2$，极高湿度培养箱

2. 复苏与传代操作 / Thawing & Subculture

1. 复苏：将冻存管快速置于 37 摄氏度水浴中摇晃融化（约 1-2 分钟）。吸出细胞悬液加至含 8-10 mL 预热完整培养基的离心管中，125 x g 离心 5 分钟。弃上清，用预热培养基重悬，接种至 T25 培养瓶，接种密度建议在 $0.5 \times 10^6\text{ cells/mL}$ 以上。

2. 传代与维持：

   • 维持细胞密度在 $0.3 - 0.5 \times 10^6\text{ cells/mL}$。

   • 每 2 至 3 天按 1:2 或 1:3 比例补加新培养基或稀释传代。

   • 最大生长密度一般不超过 $1.0 \times 10^6\text{ cells/mL}$。

3. 冻存保存 / Cryopreservation

• 冻存液配方：70% RPMI-1640 + 20% FBS + 10% DMSO

• 冻存密度：$3 - 5 \times 10^6\text{ cells/vial}$，采用程序降温冻存并长期保存于液氮（-196 摄氏度）。

四、 技术指标简表 / Technical Data Summary

BioVector® MUTU-III Cell Line

1. Background and Origin

MUTU-III (also designated as MUTU 3 or Mutu-3) is a human B-cell line derived from an endemic Epstein-Barr virus (EBV)-positive Burkitt lymphoma (BL).

The MUTU cell line family was established by serial passaging of the parental clone MUTU-BL, isolated from a biopsy of a male patient carrying the classic $t(8;14)$ translocation.MUTU-III represents the EBV Latency Type III phenotype, characterized by high expression of the full spectrum of latent viral proteins (including EBNA1, EBNA2, EBNA3s, EBNA-LP, and LMP1/LMP2) and viral microRNAs.Its sister clone, MUTU-I, maintains a restricted Type I latency (expressing only EBNA1). MUTU-III serves as an essential cell model for studying EBV latency switching, viral oncogenesis, LMP1/EBNA2 pathway signaling, and immune evasion mechanisms.

2. Biological Characteristics

• Taxonomy & Source: Homo sapiens, B lymphocyte, Burkitt lymphoma

• Biosafety Level: BSL-2 (EBV positive; presents potential lytic activity and viral transmission risks during manipulation)

• Growth Properties: Suspension; grows in clusters or single cells with background cell debris

• Phenotypic & Marker Features:

  • Surface Antigens: CD19(+), CD20(+), CD37(+), CD38(+), CD80(+), HLA-DR(+), cyCD79a(+)

  • Genetics: Translocation $t(8;14)$; heterozygous mutation in MYC (p.Thr73Asn)

  • Viral Status: EBV(+) (Latency Type III, high EBNA2 & LMP1 expression)

• Primary Applications: EBV latency/lytic cycle regulation, LMP1/EBNA2 signal transduction, lymphoma immunotherapy target validation, antiviral drug screening

3. Culture and Handling Protocols

Recommended Growth Medium

• Base Medium: RPMI-1640

• Supplements: 10% to 20% heat-inactivated Fetal Bovine Serum (FBS)

• Culture Conditions: 37 degrees Celsius, 5% $CO_2$, humidified incubator

Thawing and Subculture Protocol

1. Thawing: Thaw the frozen vial rapidly in a 37 degrees Celsius water bath. Transfer contents into 8–10 mL pre-warmed complete medium and centrifuge at 125 x g for 5 minutes. Resuspend in fresh medium and seed at $\ge 0.5 \times 10^6\text{ cells/mL}$.

2. Subculturing:

   • Maintain working cell density between $0.3 - 0.5 \times 10^6\text{ cells/mL}$.

   • Split cells 1:2 to 1:3 every 2–3 days by adding fresh medium.

   • Do not allow density to exceed $1.0 \times 10^6\text{ cells/mL}$.

Cryopreservation

• Freezing Medium: 70% RPMI-1640 + 20% FBS + 10% DMSO

• Storage: Freeze at $3 - 5 \times 10^6\text{ cells/vial}$ using slow-freezing containers and store in liquid nitrogen (-196 degrees Celsius).

4. Technical Data Summary

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

E-mail:BioVector@163.com

网址http://www.biovector.net