BioVector® pHIPX4 表达质粒载体（多形汉逊酵母表达质粒） / BioVector® pHIPX4 Expression Vector (Hansenula polymorpha Expression Vector)

一、 背景与来源说明 / Background & Origin

BioVector® pHIPX4 是一种专用于多形汉逊酵母（Hansenula polymorpha，现分类名为 Ogataea polymorpha）重组蛋白高效表达的游离型/整合型酵母表达载体（Yeast Expression Vector）。

多形汉逊酵母作为甲醇营养型酵母（Methylotrophic Yeast），具有生长速度快、耐高温（可在 37–45 摄氏度下生长）、培养成本低及能够进行复杂的真核后翻译修饰（如糖基化、二硫键形成）等优势。BioVector® pHIPX4 载体通常基于强诱导型或强强效表达启动子（如甲醇氧化酶启动子 PMOX 或 PAOX / PFMD），常带有 LEU2 或 URA3 等营养缺陷型选择标记以及大肠杆菌复制起始位点（ori）和氨苄青霉素抗性基因（AmpR），用于大肠杆菌克隆扩增与多形汉逊酵母的基因表达。

BioVector® pHIPX4 载体图谱结构示意图. Source: ResearchGate

二、 质粒载体生物学特征 / Vector Characteristics

• 载体类型 / Vector Type：酵母表达载体（Yeast Expression Vector / Shuttling Vector）

• 表达宿主 / Expression Host：多形汉逊酵母（Hansenula polymorpha / Ogataea polymorpha）

• 克隆宿主 / Cloning Host：大肠杆菌（E. coli，如 BioVector® DH5$\alpha$ 或 BioVector® TOP10）

• 启动子 / Promoter：强诱导型/强表达启动子（如 PMOX 或 PFMD，受甲醇诱导或甘油/甲醇调控）

• 筛选标记 / Selection Markers：

  • 酵母筛选标记：LEU2 或 URA3（互补营养缺陷型宿主）

  • 原核筛选抗性：Ampicillin（氨苄青霉素，100 μg/mL）

• 主要应用 / Key Applications：重组疫苗（如 HPV L1 蛋白、乙肝表面抗原 HBsAg）、工业酶制剂及药用重组蛋白在多形汉逊酵母中的高密度发酵表达

三、 培养条件与操作指南 / Handling & Protocols

1. 大肠杆菌克隆与扩增 / E. coli Cloning & Propagation

• 培养基 / Medium：BioVector® LB Broth 或 BioVector® LB Agar

• 抗性浓度 / Antibiotics：100 μg/mL Ampicillin

• 培养条件 / Incubation：37 摄氏度，振荡培养（220–250 rpm）

2. 酵母转化与发酵表达 / Yeast Transformation & Expression

1. 载体线性化（可选，用于基因整合）：使用限制性内切酶对 BioVector® pHIPX4 进行单切线性化，以提高基因整合至多形汉逊酵母基因组的效率。

2. 酵母电转化/化学转化：制备多形汉逊酵母感受态细胞，利用电穿孔（Electroporation）或 PEG/LiAc 法转入线性化或环状质粒。

3. 筛选与表达诱导：

   • 将转化混合物涂布于 BioVector® MD（Minimal Dextrose） 或 SD-Leu / SD-Ura 缺陷培养基 平板上筛选阳性克隆。

   • 采用甘油或甲醇进行碳源调控与诱导表达（添加 0.5%–1% 甲醇诱导强启动子表达）。

四、 技术指标简表 / Technical Data Summary

BioVector® pHIPX4 Expression Vector (Hansenula polymorpha Expression Vector)

1. Background and Origin

BioVector® pHIPX4 is an expression plasmid designed for recombinant protein production in the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha (also classified as Ogataea polymorpha).

H. polymorpha is a widely used eukaryotic expression system offering key advantages such as rapid growth, thermotolerance (up to 37–45 degrees Celsius), low-cost high-density fermentation, and complex post-translational modifications. The BioVector® pHIPX4 vector incorporates a strong inducible or constitutive promoter (such as the methanol oxidase promoter PMOX), a yeast auxotrophic selection marker (LEU2 or URA3), an E. coli origin of replication (ori), and an ampicillin resistance marker (AmpR) for propagation in bacterial hosts.

2. Vector Characteristics

• Vector Type: Yeast Expression / Shuttle Vector

• Expression Host: Hansenula polymorpha / Ogataea polymorpha

• Cloning Host: E. coli (e.g., BioVector® DH5$\alpha$ or BioVector® TOP10)

• Promoter: PMOX (Methanol Oxidase Promoter) or equivalent inducible promoter

• Selection Markers:

  • Yeast Marker: LEU2 or URA3 (for complementing auxotrophic strains)

  • Bacterial Marker: Ampicillin (100 μg/mL)

• Primary Applications: High-yield production of recombinant vaccines (e.g., HPV L1 virus-like particles, HBsAg), industrial enzymes, and biopharmaceuticals via H. polymorpha fermentation

3. Handling Protocols

E. coli Propagation

• Growth Medium: BioVector® LB Broth / BioVector® LB Agar

• Antibiotics: Ampicillin (100 μg/mL)

• Incubation: 37 degrees Celsius, shaking at 220–250 rpm

Yeast Transformation & Expression

1. Linearization: Digest BioVector® pHIPX4 with a unique restriction enzyme to facilitate genomic integration into H. polymorpha.

2. Transformation: Transform electrocompetent or PEG/LiAc-treated H. polymorpha cells.

3. Selection & Induction: Plate on BioVector® SD-Leu / SD-Ura Minimal Medium. Induce protein expression by replacing glucose/glycerol with 0.5–1% methanol.

4. Technical Data Summary

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

E-mail:BioVector@163.com

网址http://www.biovector.net