BioVector® pTac-GST-Scamp2(mouse)-6×His 表达质粒载体 / BioVector® pTac-GST-Scamp2(mouse)-6×His Expression Vector

一、 背景与来源说明 / Background & Origin

BioVector® pTac-GST-Scamp2(mouse)-6×His 是一种原核重组蛋白表达与双标签纯化质粒载体，专用于在大肠杆菌（E. coli）中高效表达及纯化小鼠来源的分光分泌载体相关膜蛋白 2（Secretory Carrier Membrane Protein 2, Scamp2）。

Scamp2 是一种广泛存在于神经元及内分泌细胞囊泡中的四次跨膜蛋白，在突触囊泡与细胞膜的胞吐作用（Exocytosis）、膜融合以及内吞循环中起关键调节作用。该载体结合了 GST（谷胱甘肽 S-转移酶） 巨型增溶/融合标签（N端）与 6×His（六组氨酸） 亲和纯化标签（C端），并由强效且受 IPTG 严格诱导的 pTac 启动子 驱动表达，是研究 Scamp2 蛋白结构、膜相互作用、体外下拉（GST Pull-down）及金属螯合亲和层析（Ni-NTA）双重纯化的理想工具。

二、 质粒载体生物学特征 / Vector Characteristics

• 载体类型 / Vector Type：原核重组蛋白表达质粒（Prokaryotic Protein Expression Vector）

• 表达宿主 / Expression Host：大肠杆菌（E. coli，如 BioVector® BL21(DE3)、BioVector® Rosetta(DE3) 或 BioVector® DH5$\alpha$）

• 克隆宿主 / Cloning Host：大肠杆菌（E. coli，如 BioVector® DH5$\alpha$ 或 BioVector® TOP10）

• 启动子 / Promoter：pTac 启动子（杂合强启动子，由 trp 与 lac 启动子融合而成，受 IPTG 强效诱导）

• 靶基因与物种 / Gene & Species：小鼠（Mus musculus）Scamp2 基因

• 融合标签 / Fusion Tags：

  • N端标签：GST Tag（增加蛋白可溶性，支持 Glutathione Sepharose / GST 亲和纯化与 Pull-down）

  • C端标签：6×His Tag（支持 Ni-NTA / TALON IMAC 亲和纯化及 Western Blot 标记检测）

• 筛选标记 / Selection Marker：Ampicillin（氨苄青霉素，100 $\mu\text{g/mL}$）

• 主要应用 / Key Applications：小鼠 Scamp2 蛋白的重组表达与高效纯化、GST Pull-down 互作蛋白筛选、胞吐与膜蛋白机制研究

三、 培养条件与诱导纯化指南 / Handling & Protocols

1. 质粒保存与大肠杆菌扩增 / E. coli Propagation

• 培养基 / Medium：BioVector® LB Broth 或 BioVector® LB Agar

• 抗性浓度 / Antibiotic：100 $\mu\text{g/mL}$ Ampicillin

• 培养条件 / Incubation：37 摄氏度，振荡培养（220–250 rpm）

2. 重组蛋白表达与诱导 / Protein Expression & Induction

1. 转化与接种：将质粒转化至表达宿主（如 BioVector® BL21(DE3)）中，涂布于含 Ampicillin 的 LB 板上。挑取单克隆接种于 LB 液体培养基，过夜培养。

2. 扩增与诱导：

   • 按 1:100 稀释接种至大培养体积（如 500 mL），于 37 摄氏度培养至 $\text{OD}_{600} = 0.6\text{--}0.8$。

   • 加入 IPTG（终浓度 0.2–0.5 mM），降低温度至 16–25 摄氏度 诱导表达 12–16 小时（低温诱导有助于防止膜蛋白/复杂蛋白形成包含体）。

3. 超声破菌与细胞裂解：离心收集菌体，用含非离子去污剂（如 1% Triton X-100 或 DDM，因 Scamp2 为膜蛋白）的超声裂解缓冲液重悬菌体，超声冰浴破菌。

3. 双标签亲和纯化 / Dual-Tag Purification

• 第一步（GST 亲和纯化）：裂解上清结合至 Glutathione Sepharose 4B 磁珠/填料，用含还原型谷胱甘肽（GSH, 10 mM）的缓冲液洗脱。

• 第二步（His 亲和纯化）：将洗脱液过 Ni-NTA 柱，使用 200–500 mM 咪唑（Imidazole）缓冲液梯度洗脱，即可获得高纯度、无降解的完整双标签 Scamp2 蛋白。

四、 技术指标简表 / Technical Data Summary

BioVector® pTac-GST-Scamp2(mouse)-6×His Expression Vector

1. Background and Origin

BioVector® pTac-GST-Scamp2(mouse)-6×His is a prokaryotic expression plasmid designed for high-yield expression and dual-tag affinity purification of mouse Secretory Carrier Membrane Protein 2 (Scamp2) in Escherichia coli.

Scamp2 is a tetraspan membrane protein enriched in secretory vesicles and plasma membranes, playing a pivotal role in exocytosis, membrane fusion, and endocytic recycling. This expression construct features a strong IPTG-inducible pTac promoter, an N-terminal GST (Glutathione S-Transferase) tag to enhance solubility and support GST pull-down assays, and a C-terminal 6×His tag for immobilized metal affinity chromatography (IMAC/Ni-NTA) purification.

2. Vector Characteristics

• Vector Type: Prokaryotic Protein Expression Vector

• Expression Host: E. coli (e.g., BioVector® BL21(DE3), BioVector® Rosetta(DE3))

• Cloning Host: E. coli (e.g., BioVector® DH5$\alpha$ or BioVector® TOP10)

• Promoter: pTac Promoter (Strong IPTG-inducible hybrid promoter)

• Gene / Species: Mouse (Mus musculus) Scamp2

• Tags:

  • N-terminal Tag: GST Tag (Solubility enhancement and GST pull-down/Glutathione affinity)

  • C-terminal Tag: 6×His Tag (Ni-NTA IMAC purification and immunodetection)

• Selection Marker: Ampicillin (100 $\mu\text{g/mL}$)

• Primary Applications: Recombinant mouse Scamp2 protein production, dual affinity purification, membrane protein interaction, and exocytosis studies

3. Handling & Expression Protocols

E. coli Propagation

• Growth Medium: BioVector® LB Broth / BioVector® LB Agar

• Antibiotics: Ampicillin (100 $\mu\text{g/mL}$)

• Incubation: 37 degrees Celsius, shaking at 220–250 rpm

Protein Induction & Purification Protocol

1. Transformation: Transform plasmid into E. coli expression strain (e.g., BL21(DE3)).

2. Induction: Grow culture to $\text{OD}_{600} = 0.6\text{--}0.8$ at 37 degrees Celsius. Induce protein expression by adding IPTG (0.2–0.5 mM) and shift the temperature to 16–25 degrees Celsius for 12–16 hours to minimize inclusion body formation.

3. Lysis & Cell Extraction: Harvest cells, resuspend in lysis buffer containing mild non-ionic detergent (e.g., 1% Triton X-100 or DDM to solubilize membrane-associated Scamp2), and sonicate on ice.

4. Purification: Perform sequential GST-Sepharose affinity chromatography followed by Ni-NTA IMAC to yield full-length, highly purified Scamp2 recombinant protein.

4. Technical Data Summary

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

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