BioVector® CKK-GFP 植物表达与报道质粒载体 / BioVector® CKK-GFP Plant Expression and Reporter Vector

一、 背景与来源说明 / Background & Origin

BioVector® CKK-GFP 是一种专为植物系统（如拟南芥 Arabidopsis thaliana、烟草 Nicotiana benthamiana、水稻及玉米等）设计的植物表达与绿色荧光蛋白（GFP）报道质粒载体。

该载体通常驱动 GFP 表达，用于植物转基因筛选、基因表达启动子活性分析（Promoter Reporter）、蛋白亚细胞定位（Subcellular Localization）以及农杆菌介导的植物瞬时/稳定转化。

二、 质粒载体生物学特征 / Vector Characteristics

• 载体类型 / Vector Type：植物二进制表达质粒 / 植物报道载体 (Plant Binary Expression / Reporter Vector)

• 宿主与系统 / Hosts & Systems：

  • 转化宿主 / Transformation Host：农杆菌（如 Agrobacterium tumefaciens GV3101、LBA4404）及植物原生质体 / Agrobacterium and Plant Protoplasts

  • 克隆宿主 / Cloning Host：大肠杆菌（如 DH5alpha、TOP10） / E. coli (such as DH5alpha, TOP10)

• 关键功能元件 / Functional Elements：

  • 植物启动子 / Plant Promoter：花椰菜花叶病毒 CaMV 35S 强启动子 或植物内源启动子 / CaMV 35S Promoter or endogenous plant promoter

  • 报道基因 / Reporter Gene：GFP（绿色荧光蛋白，激发波长 ~488 nm，发射波长 ~507 nm） / GFP (Ex ~488 nm, Em ~507 nm)

  • T-DNA 边界 / T-DNA Borders：包含 Left Border (LB) 与 Right Border (RB)，用于基因整合至植物基因组

• 筛选标记 / Selection Markers：

  • 大肠杆菌/农杆菌抗性 / Bacterial Resistance：Kanamycin (50 ug/mL) 或 Spectinomycin (50 ug/mL)

  • 植物筛选抗性 / Plant Selection Marker：Hygromycin B (潮霉素) 或 Kanamycin (卡那霉素)

• 主要应用 / Primary Applications：植物瞬时表达（烟草本氏叶片侵染）、农杆菌介导稳定转化、蛋白细胞内定位及荧光报道检测 / Transient expression, plant stable transformation, sub-cellular localization, reporter assays

三、 植物转染与荧光观察指南 / Protocol for Plant Transformation & Imaging

1. 质粒提取与农杆菌转化 / Agrobacterium Transformation

• 使用高纯度质粒提取试剂盒提取 BioVector® CKK-GFP 质粒 DNA。

• 将质粒转入 农杆菌 GV3101 感受态细胞，涂布于含对应抗性的 YEB/LB 平板上，28 摄氏度培养 48 小时。

2. 烟草叶片瞬时表达 / Transient Expression in Tobacco

1. 重悬重组菌 / Resuspension：收集农杆菌沉淀，用侵染缓冲液（包含 10 mM MES, 10 mM MgCl2, 100–150 uM Acetosyringone）重悬至 OD600 为 0.6–0.8。

2. 注射侵染 / Infiltration：静置 2–3 小时后，用无针头注射器将菌液从烟草（N. benthamiana）叶片背部注射入气孔内。

3. 培养观察 / Incubation：将烟草置于温室培养 36–72 小时。

3. 荧光检测与共聚焦显微术 / Confocal Imaging

• 撕取烟草叶片下表皮或切片，置于荧光/共聚焦显微镜下，使用 FITC/GFP 通道（Ex: 488 nm, Em: 507 nm） 观察 GFP 信号及胞内定位分布。

四、 技术指标简表 / Technical Data Summary

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

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