BioVector® dCas13a 基于催化活性失活的 Type VI CRISPR RNA 引导核酸酶 dCas13a（dead Cas13a / dLwaCas13a / dPspCas13a） 开发的靶向 RNA 调控载体质粒  

一、 背景与机制说明  

BioVector® dCas13a 质粒 是基于催化活性失活的 Type VI CRISPR RNA 引导核酸酶 dCas13a（dead Cas13a / dLwaCas13a / dPspCas13a） 开发的靶向 RNA 调控载体。与切割 RNA 的活性 Cas13a 不同，dCas13a 突变掉了其 HEPN 催化结构域的核心氨基酸，丧失了 RNA 切割活性，但保留了高亲和力、高特异性结合目标单链 RNA（ssRNA）的能力。

通过融合不同的功能效应蛋白（如碱基修饰酶、荧光蛋白、翻译调控因子等），dCas13a 载体构建了强大的 RNA 活细胞成像、活细胞 RNA 碱基编辑、RNA 剪接调控及 RNA 翻译抑制 平台。

二、 质粒元件与特征  

• 载体骨架：pLenti-CMV / pCAG-MCS / pC2c2

• 启动子：CMV / CAG / EF1a（驱动 dCas13a）；U6 / 7SK（驱动 gRNA）

• 效应融合结构域：      

  • RNA 活细胞成像：dCas13a-EGFP / dCas13a-mCherry / dCas13a-HaloTag

  • RNA 碱基编辑（REPAIR 系统）：dCas13a-ADAR2(DD)（实现高特异性 A-to-I / A-to-G 转换）

  • RNA 翻译调控：dCas13a-eIF4E / dCas13a-MCP

  
  

• 筛选标记：      

  • 大肠杆菌抗性：Ampicillin（氨苄青霉素）/ Kanamycin（卡那霉素）

  • 哺乳动物筛选：Puromycin（嘌呤霉素）/ Blasticidin / Neomycin

  
  

• 宿主菌株：BioVector® Stbl3 或 DH5α

三、 实验应用与操作指南  

1. 载体系统构建与共转染

表达 dCas13a-融合蛋白 的质粒与表达 gRNA 的质粒按 1:1 至 2:1 的摩尔比共转染宿主细胞。间隔区（Spacer）推荐设计为 28–30 nt。

2. 活细胞 RNA 成像与检测

转染 24–48 小时后，使用荧光显微镜或共聚焦显微镜观察目标 RNA 在细胞内的分布与定位。

四、 技术指标简表  

BioVector® dCas13a Plasmid  

1. Background & Function  

BioVector® dCas13a Plasmid is a targeted RNA manipulation vector based on the catalytically inactive Type VI CRISPR RNA-guided nuclease dCas13a (dead Cas13a / dLwaCas13a / dPspCas13a). Unlike wild-type Cas13a that cleaves RNA, dCas13a carries point mutations in its HEPN catalytic domains. It lacks RNA cleavage activity while preserving high-affinity and high-specificity binding to target single-stranded RNA (ssRNA).

By fusing dCas13a to diverse functional effector domains (e.g., base editing enzymes, fluorescent proteins, translational regulators), this system serves as a versatile tool for live-cell RNA imaging, RNA base editing, splicing regulation, and translational control.

2. Vector Architecture & Features  

• Vector Backbone: pLenti-CMV / pCAG-MCS / pC2c2

• Promoters: CMV / CAG / EF1a (dCas13a); U6 / 7SK (gRNA)

• Effector Fusion Domains:      

  • RNA Live-Cell Imaging: dCas13a-EGFP / dCas13a-mCherry / dCas13a-HaloTag

  • RNA Base Editing (REPAIR System): dCas13a-ADAR2(DD) (precise A-to-I / A-to-G editing)

  • RNA Translation Control: dCas13a-eIF4E / dCas13a-MCP

  
  

• Selection Markers:      

  • Bacterial Selection: Ampicillin (100 μg/mL) / Kanamycin (50 μg/mL)

  • Mammalian Selection: Puromycin / Blasticidin / Neomycin

  
  

• Host Strain: BioVector® Stbl3 or DH5α

3. Application & Protocol  

1. Vector Co-Transfection

Co-transfect the dCas13a-fusion plasmid and gRNA plasmid at a molar ratio of 1:1 to 2:1 into host cells. Design spacer sequences of 28–30 nt.

2. Live-Cell RNA Visualization

At 24–48 hours post-transfection, observe the spatial distribution and dynamic localization of target RNA using fluorescence microscopy.

4. Technical Data Summary  

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