BioVector® 根癌农杆菌 A136 (pCF218, pCF372) AHL 报告菌株  

一、 背景与机制说明  

BioVector® 根癌农杆菌 A136 (pCF218, pCF372) 是一株专用于检测细菌群体感应（Quorum Sensing, QS）信号分子——酰化高丝氨酸内酯（AHLs）的高灵敏度报告菌株。

该宿主菌 A136 缺失无 Ti 质粒且不产内源性 AHL。菌株内共存两个报告质粒：pCF218（表达受 AHL 调控的 TraR 蛋白）与 pCF372（含 traI-lacZ 融合基因）。当环境存在 AHLs 时，TraR 结合 AHL 并激活 traI-lacZ 表达，通过催化 X-Gal 或 ONPG 实现定性或定量检测。

二、 菌株元件与特征  

• 宿主背景：Agrobacterium tumefaciens A136 (Ti-plasmid cured C58)

• 双质粒系统：      

  • pCF218：编码 TraR 蛋白（Tet^R 抗性）

  • pCF372：编码 traI-lacZ 报告基因（Spec^R 抗性）

  
  

• 筛选标记：Rifampicin (50 μg/mL) + Tetracycline (4.5 μg/mL) + Spectinomycin (50 μg/mL)

• 培养条件：LB 或 YEB 培养基，28°C 培养（切勿超过 30°C）

三、 实验应用与 AHL 检测指南  

1. X-Gal 平板划线法（定性检测）

在含三抗与 X-Gal (40 μg/mL) 的 YEB/LB 平板上接种 A136 报告菌株与待测菌株，28°C 培养 12–24 小时，生成蓝色斑环即表明待测样含有 AHLs。

2. β-半乳糖苷酶活性比色法（定量检测）

共培养 A136 与待测样品，加入 ONPG 底物反应并在 OD420 处测定吸光度，计算米勒单位（Miller Units）定量 AHL 含量。

四、 技术指标简表  

BioVector® Agrobacterium tumefaciens A136 (pCF218, pCF372) AHL Reporter Strain  

1. Background & Function  

BioVector® Agrobacterium tumefaciens A136 (pCF218, pCF372) is a highly sensitive biosensor strain engineered for detecting N-acyl homoserine lactones (AHLs), key signal molecules involved in bacterial quorum sensing (QS).

The host strain A136 is cured of the Ti-plasmid and lacks endogenous AHL production. It harbors two plasmids: pCF218 (expressing TraR) and pCF372 (containing a traI-lacZ fusion). Binding of exogenous AHLs to TraR activates traI-lacZ expression, driving β-galactosidase-mediated colorimetric detection.

2. Strain Architecture & Features  

• Host Genotype: Agrobacterium tumefaciens A136 (Ti-plasmid cured C58 derivative)

• Plasmid System:      

  • pCF218: Encodes TraR activator (Tet^R)

  • pCF372: Encodes traI-lacZ reporter fusion (Spec^R/Str^R)

  
  

• Antibiotic Selection: Rifampicin (50 μg/mL) + Tetracycline (4.5 μg/mL) + Spectinomycin (50 μg/mL)

• Culture Parameters: YEB/LB medium at 28°C

3. Application & Protocol  

1. X-Gal Agar Assay

Streak A136 on YEB/LB plates containing Rif/Tet/Spec and X-Gal (40 μg/mL). Incubate at 28°C for 12–24 hours to observe blue halo formation upon AHL presence.

2. Quantitative β-Galactosidase Assay

Co-incubate A136 with samples, react with ONPG substrate, and measure OD420 to calculate Miller Units for AHL quantification.

4. Technical Data Summary  

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